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SHZ-LM柱层析纯化操作指南

发表时间： 2026-04-17 08:22:00

作者： 蔡平

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柱层析纯化操作指南一、原理简述仝莫柱层析基于混合物中各组分在固定相（硅胶/氧化铝）和流动相（洗脱剂）之间吸附能力的差异，在色谱柱中实现分离。二、实验前准备材料与

柱层析纯化操作指南

一、原理简述

仝莫柱层析基于混合物中各组分在固定相（硅胶/氧化铝）和流动相（洗脱剂）之间吸附能力的差异，在色谱柱中实现分离。

二、实验前准备

材料与设备：
  1. 色谱柱（带活塞）
  2. 硅胶（200-300目，常用）
  3. 洗脱剂（需预先优化极性，常用石油醚/乙酸乙酯体系）
  4. 收集试管、旋转蒸发仪
  5. 样品（溶解于少量低极性溶剂中）

三、操作步骤

1. 装柱
  • 干法：将硅胶均匀倒入柱中，轻敲柱壁使其密实，再缓慢加入洗脱剂润湿。
  • 湿法：硅胶与洗脱剂调成浆状，一次性倒入柱中，避免分层。
  • 关键：硅胶面平整、无气泡、无裂缝。
2. 上样
  • 将样品溶解于***小体积的低极性溶剂中，用滴管沿柱壁缓慢加入。
  • 可在硅胶顶端加一层石英砂或滤纸，防止加液时冲散硅胶层。
3. 洗脱与收集
  • 用合适极性的洗脱剂进行梯度洗脱（通常从低极性开始）。
  • 按固定体积（如10-15 mL）分段收集，TLC跟踪监测，合并相同组分。
4. 后处理
  • 将目标组分溶液旋转蒸发除去洗脱剂，得纯品。

四、实用技巧

  1. 洗脱剂选择：参考TLC条件，使目标产物Rf值在0.2-0.3左右。
  2. 三明治上样法：若样品溶解度差，可吸附于少量硅胶后上样。
  3. 压力辅助：若分离困难，可用加压或减压方式加快流速、改善分离效果。

五、常见问题

  • 拖尾严重 → 调整洗脱剂极性，或样品负载量过大。
  • 分不开 → 尝试更换洗脱剂体系（如加入二氯甲烷/甲醇）。
  • 硅胶开裂 → 装柱时需充分润湿，避免干柱。


SHZ-LM柱层析纯化操作指南
柱层析纯化操作指南一、原理简述仝莫柱层析基于混合物中各组分在固定相（硅胶/氧化铝）和流动相（洗脱剂）之间吸附能力的差异，在色谱柱中实现分离。二、实验前准备材料与
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